久久亚洲AV无码日韩一区二区_五月丁香免费视频观看,老熟女_国产精品久久久精品无码久秀色_国产无遮挡裸体免费视频在线观看_国产成人精品午夜福利A蜜臀



    • 

  • <var id="tycmz"></var>
  • <big id="tycmz"></big>
    



    
    
    
        
        
    
            
    
                
                
                
    
                    
    咨詢熱線
    
                    
    15800446246
    
                
    
            
    
        
    
       
        
        
    
    

    








    


    
  
    
    
    
       
       
      
    
  
    產(chǎn)品目錄
    
  
    
    
  
    
  
  

    
      
      
      
    
        
    
          
    
            您的位置： 網(wǎng)站首頁 > 技術(shù)文章 > 蛋白共提取試劑盒對于體外培養(yǎng)細胞的方法
          
    
        
    
        
    
          
    
            
    蛋白共提取試劑盒對于體外培養(yǎng)細胞的方法
    
            
    
              發(fā)布日期：
              2018-05-21
            
    
            
    
              瀏覽人氣：
              2942
            
    
          
    
          
    
                蛋白共提取試劑盒是從培養(yǎng)細胞和動物組織樣品同時抽提RNA和DNAzui為快速簡單的方法。本試劑盒基于硅膠柱純化技術(shù)，提取過程中無需使用有毒的酚氯仿抽提，也無需進行耗時的醇類沉淀，整個過程只需35分鐘。該方法得到的RNA可直接用于RT-PCR, Northern blot, poly-A 純化，核酸保護和體外翻譯等實驗。
        1．根據(jù)用量取適當?shù)臐{蛋白抽提試劑和核蛋白抽提試劑加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。PMSF需現(xiàn)用現(xiàn)加，若目標蛋白含有豐富的半胱氨酸，可以在兩種蛋白抽提液中加入DTT至終濃度0.5mM。
        2．對于貼壁細胞，去除培養(yǎng)液，用PBS洗一遍，用細胞刮刀收集細胞，或用EDTA消化后吹打下細胞（不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白）。500g離心2～3分鐘收集細胞，吸盡上清留下沉淀備用。
        3．對于懸浮細胞：用PBS洗一遍，500g離心2～3分鐘收集細胞，吸盡上清，留下細胞沉淀備用。
        4．每20ul細胞沉淀加入200ul漿蛋白抽提試劑（2×106個細胞沉淀約20ul或40mg）。
        5．用移液器吹打或高速渦旋15秒（可適當延長），必須使細胞沉淀*分散開成單細胞懸液。細胞沉淀分散不*會導致蛋白產(chǎn)量降低。
        6．冰浴10分鐘。
        7．zui高轉(zhuǎn)速劇烈渦旋10秒，4℃12000～16000g離心10分鐘。
        8．上清即為抽提得到的細胞漿蛋白，立即吸取上清至預冷的樣品管中備用，進行后續(xù)的PAGE、Western等實驗，但蛋白濃度較低，可根據(jù)需要進行相應濃縮。
        9．沉淀即為細胞核，要*吸盡殘余的上清（避免細胞漿蛋白的污染），加入50-100ul核蛋白抽提試劑。
        10．用移液器吹打或高速渦旋15秒（可適當延長）至沉淀*分散，冰浴10分鐘。
        11．zui高轉(zhuǎn)速劇烈渦旋10秒，4℃12000～16000g離心10分鐘。
        12．立即吸取上清至預冷的樣品管中，此即為抽提得到的細胞核蛋白?？蛇M行后續(xù)實驗或-70℃凍存。